Institut:Biochemie/kleine Protein Expression

Zum Test ob sich zuvor klonierte Proteine in E. coli expremieren lassen.

Methode

1 ml einer Übernachtkultur werden zu 10 ml LB+AMP Medium in einen 50 ml Falcon gegeben
Das Falcon wird fast waagerecht in den Schüttler gestellt und bei 37°C und 220 rpm geschüttelt
Nach ca. Stunde werden 3 µl 1M IPTG zugegeben (Endkonzentration: 0,3 mM)
Nach 0 (=sofort), 1, 2 und 3 Stunden werden je 50 µl abgenommen und mit 5 µl 10x SDS-Probenpuffer lysiert:
Die Proben werden auf ein SDS Gel aufgetragen
Eventuell wird ein Western Blot durchgeführt