DNA-Konzentrationsbestimmung
Über UV-Absorption.
Methode
[Bearbeiten]- Photometer anschalten, Methode "DNA" wählen, UV-Lampe 5-10 min vorglühen
- DNA-Lösung (aus Präparation) 1:250 bzw. 1:500 mit MQ verdünnen (Endvolumen 250 bzw. 500 µl)
- Verdünnung in Quarzküvetten überführen
- Bei 260 bzw. 280 nm messen (gegen MQ als Leerwert)
Anmerkung: "Zackige" Graphen zeigen eine zu geringe DNA-Konzentration an. -> neue Messung mit Verdünnung 1:100
Formel zur Berechnung der Konzentration
[Bearbeiten]| Konzentration[µg/µl] = | A260 × V × U µg |
|
| |
| 1000 µl |
(der Faktor 1000 dient dabei nur zur Einführung von "µg/µl"; der errechnete Wert ist *nicht* die DNA-Menge in der Küvette!)
Formel zur Berechnung der Reinheit
[Bearbeiten]| Reinheit = | A260 |
|
| |
| A280 |
mit
- A260 = gemessene Absorption bei 260 nm
- A280 = gemessene Absorption bei 280 nm
- V = Verdünnungsfaktor (z.B. 250 oder 500)
- U = Umrechnungsfaktor (50 für doppelsträngige DNA, 40 für einzelsträngige RNA/DNA, 20 für Oligonukleotide)
Reinheitswerte unter 1,6 deuten auf eine zu starke Verschmutzung hin. Trotzdem kann man damit z.B. Restriktionen versuchen.