leere Säule und Teflon-Einlage mit MQ und Ethanol spülen
3ml an Nickel-Chelat-Matrix (Resuspendiert in EtOH) einfüllen
Säulenmatrix mit 5×8ml Säulenvolumen Puffer A äquilibrieren
Lysat mit einer Geschwindigkeit von 1 ml/min über die Säulenmatrix geben
Matrix mit 5× 8ml Säulenvolumen Puffer B bei einer Geschwindigkeit von 1ml/min waschen
im letzten Schritt den Überstand über der Matrix FAST ganz ablaufen lassen (aber nicht trocken laufen lassen). Über der Matrix darf nur wenig Volumen Puffer stehen, sonst wird das Protein nur dünn eluiert
Elution mit 5x 1ml Puffer C
Eluate durch Spottest auf Proteingehalt testen
Lagerung der proteinhaltigen Eluate bei –20°C aus.
