Proteinexpression klein
Zum Testen der Proteinexpression.
Methode[Bearbeiten]
- 3 ml einer Übernachtkultur werden zu 27 ml LB+AMP Medium in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben
- Der Kolben wird bei 37°C und 180 rpm geschüttelt
- Nach ca. einer Stunde werden 3 µl 1M IPTG zugegeben (Endkonzentration: 0,1 mM)
- Nach 0 (=sofort), 1, 2, 3, und 4 Stunden werden je 1 ml abgenommen.
Probenvorbereitung[Bearbeiten]
- falls sich ein Zellpellett in den 3h gebildet hat so muss die Zellsuspension geschüttelt werden
- 50µl Zellsuspension mit 10µl 5xSDS-Probenpuffer versetzten
- 5min bei 95°C denaturieren
- Auf das SDS-Gel auftragen
- Ein Western-Blot wird durchgeführt
Materialien[Bearbeiten]
- Übernachtkultur, LB+AMP Medium, 1M IPTG, PBS-Puffer, 10x SDS-Probenpuffer