Proteinexpression klein

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Zum Testen der Proteinexpression.

Methode

1. 3 ml einer Übernachtkultur werden zu 27 ml LB+AMP Medium in einen 100 ml Erlenmeyerkolben gegeben
2. Der Kolben wird bei 37°C und 180 rpm geschüttelt
3. Nach ca. einer Stunde werden 3 µl 1M IPTG zugegeben (Endkonzentration: 0,1 mM)
4. Nach 0 (=sofort), 1, 2, 3, und 4 Stunden werden je 1 ml abgenommen.

Probenvorbereitung

1. 1. falls sich ein Zellpellett in den 3h gebildet hat so muss die Zellsuspension geschüttelt werden
   2. 50µl Zellsuspension mit 10µl 5xSDS-Probenpuffer versetzten
   3. 5min bei 95°C denaturieren
   4. Auf das SDS-Gel auftragen
2. Ein Western-Blot wird durchgeführt

Materialien

• Übernachtkultur, LB+AMP Medium, 1M IPTG, PBS-Puffer, 10x SDS-Probenpuffer